今天冷知识百科网小编 曾易灵 给各位分享凝胶制备方法的知识,其中也会对如何制备琼脂糖凝胶?(琼脂糖凝胶怎么配制)相关问题进行解释,如果能碰巧解决你现在面临的问题,别忘了关注本站,现在我们开始吧!
如何制备琼脂糖凝胶?
1、 取5×TBE 缓冲液20ml 加水至200ml,配制成0.5×TBE 稀释缓冲液,待用。
2、 胶液的制备:称取0.4g 琼脂糖,置于200ml 锥形瓶中,加入50ml 0.5×TBE 稀释缓冲液,放入微波炉里(或电炉上)加热至琼脂糖全部熔化,取出摇匀,此为0.8%琼脂糖凝胶液。加热过程中要不时摇动,使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜,以减少水份蒸发。
3、 胶板的制备:将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏(宽约1cm)紧密封住。将封好的胶槽置于水平支持物上,插上样品梳子,注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持1mm 左右的间隙。
向**至50-60℃的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭(E 溶液使其终浓度为0.5μg /ml(也可不把EB 加入凝胶中,而是电泳后再用0.5μg/ml 的EB 溶液浸泡染色)。用移液器吸取少量融化的琼脂糖凝胶封橡皮膏内侧,待琼脂糖溶液凝固后将剩余的琼脂糖小心地倒入胶槽内,使胶液形成均匀的胶层。倒胶时的温度不可太低,否则凝固不均匀,速度也不可太快,否则容易出现气泡。待胶完全凝固后拨出梳子,注意不
要损伤梳底部的凝胶,然后向槽内加入0.5×TBE 稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面。因边缘效应样品槽附近会有一些隆起,阻碍缓冲液进入样品槽中,所以要注意保证样品槽中应注满缓冲液。
4、 加样:取10μl 酶解液与2μl 6×载样液混匀,用微量移液*小心加入样品槽中。若DNA 含量偏低,则可依上述比例增加上样量,但总体积不可超过样品槽容量。每加完一个样品要更换tip 头,以防止互相污染,注意上样时要小心操作,避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。
5、 电泳:加完样后,合上电泳槽盖,立即接通电源。控制电压保持在60-80V,电流在40mA 以上。当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm 时,停止电泳。
6、 染色:未加EB 的胶板在电泳完毕后移入0.5μg/ml 的EB 溶液中,室温下染色20-25 分钟。
7、 观察和拍照:在波长为254nm 的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有EB 的电泳胶板。
DNA 存在处显示出肉眼可辨的桔红色荧光条带。紫光灯下观察时应戴上防护眼镜或有机玻璃面罩,以免损伤眼睛。 经照相机镜头加上近摄镜片和红色滤光片后将相机固定于照相架上,采用全色胶片,光圈5.6,曝光时间10-120 秒(根据荧光条带的深浅选择)。
8、 DNA 分子量标准曲线的制作:在放大的电泳照片上,以样品槽为起点,用卡尺测量λDNA 的EcoRⅠ和HindⅢ酶切片段的迁移距离,以厘米为单位。以核苷酸数的常用对数为纵坐标,以迁移距离为横坐标,在坐标纸上绘出连结各点的平滑曲线,即为该电泳条件下DNA 分子量的标准曲线。
9、 DNA 酶切片段大小的测定:在放大的电泳照片上,用卡尺量出DNA 样品各片段的迁移距离,根据此数值,在DNA 分子量标准曲线上查出相应的对数值,进一步计算出各片段的分子量大小(若用单对数坐标纸来绘制标准曲线,则可根据迁移距离直接查出DNA 片段的大小)。反之,若已知DNA 片段的大小亦可由标准曲线上查出它预计的迁移距离。
10、 DNA 酶切片段排列顺序的确定:根据单酶切,双酶切和多酶切的电泳分析结果,对照DNA 酶切片段大小的数据进行逻辑推理,然后确定各酶切片段的排列顺序和各酶切位点的相对位置。以环状图或直线图表示,即成该DNA 分子的限制性内切酶图谱。
由液体制备n凝胶须满足的条件?
一种特殊的分散体系,其中胶体颗粒或高聚物分子相互连接,搭成架子,形成空间网状结构,液体或气体充满在结构空隙中。其性质介于固体和液体之间,从外表看,它成固体状或半固体状,有弹性;但又和真正的固体不完全一样,其内部结构的强度往往有限,易于破坏。
制备 溶液或固体(干凝胶)都能形成凝胶。从固体制备凝胶比较简单,干胶吸收液体膨胀即成,通常为弹性凝胶。从溶液制备凝胶须满足两个基本条件:①降低溶解度,使固体物质从溶液中成“胶体分散态”析出;②析出的固体质点既不沉降,也不能自由移动,而是搭成骨架形成连续的网状结构。具体的制备方法可以有;①**胶体溶液,产生过饱和溶液。如0.5%琼脂溶液冷到35℃就形成固体状胶冻;②加入非溶剂,例如果胶水溶液加入酒精后就形成凝胶;③加入盐类,适量的电解质加入到胶粒的亲水性较强尤其是形状不对称的疏液溶胶中,即可形成凝胶,如五**二钒、氢**铁等;④化学反应,利用化学反应产生不溶物,并控制反应条件可得凝胶,如硅胶的制备。
应用 凝胶在国民经济与人们日常生活中占有重要地位。工业上,橡胶软化剂的应用,皮革的鞣制,纸浆的生产,吸附剂、催化剂和离子交换剂的使用;生物学和生理学中有重要意义的细胞膜,红血球膜和肌肉组织的纤维都是凝胶状物体。不少生理过程,如血液的凝结、人体的衰老等都与凝胶作用有关。
至于豆腐 降低豆汁溶解度,使固体物质从溶液中成“胶体分散态”析出;②析出的固体质点既不沉降,也不能自由移动,而是搭成骨架形成连续的网状结构。加入非溶剂 加入盐类 就得到了豆腐。
制备温敏性水凝胶的材料?
一种可负载细胞的温敏性水凝胶材料的制备方法:
(1)溴化甲基纤维素MC-Br的制备:
将甲基纤维素干燥,在60℃真空烘箱中烘24h。将干燥后的乙基纤维素溶解在溶剂A中并加入少量三乙胺,冰浴下缓慢滴加2-溴异丁酰于烧瓶中,搅拌反应30h。反应完透析冻干,得到产物MC-Br。
(2)甲基纤维素接枝共聚物MC-(MEO2MA-co-OEGMA475)的制备:
在氮气保护下,将步骤(1)中所得产物与OEGMA475和MEO2MA、PMDETA、CuBr与溶剂B加入至单口烧瓶中进行ATRP反应,体系经过:抽真空-充氩气三个回合后,在氩气气氛、60℃、磁力搅拌条件下反应,反应4~8小时,透析并冻干,得到甲基纤维素接枝共聚物MC-(MEO2MA-co-OEGMA),即可负载细胞的温敏性水凝胶材料。其中投料配方比按照所需水凝胶低临界相转变温度(LCST)调节。
pcr琼脂糖凝胶怎么制作?
根据浓度与体积计算所需琼脂糖,放入三角瓶,加入所需体积的缓冲液,摇匀,放入微波炉,中低火加热至沸腾。摇匀,继续加热至琼脂糖全部溶解,液体变清亮。室温凉至50~60℃左右,可加入染料,混匀,倒入凝胶槽制备凝胶。
凝胶永生花制作方法?
其大体的流程如下:1、挑选新鲜的花进行加工,加工前一定要确认花是没有沾水。2、根据您喜好的花茎长度剪掉多余的花茎和叶,一般花茎留2cm。3、往放有花的密封容器里倒入A液盖上盖,将花充分浸泡进液体里。4、在A液体里浸泡24小时后,开盖观察花是否全成为了白色,如还有余色需继续。5、不可离开A液体停留在空气中超过60秒,应尽量快的移放到B液体里(一般浸泡36小时)。6、放在干燥、通风、避光的地方自然干燥。7、七日后完全干燥。8、将永生花染色处理,3到5天晾干,成品花头,整个制作过程需要10天以上