当前有哪些筛选基因突变的有效方法?
焦磷酸测序法 测序法的基本原理是双脱氧终止法,是进行基因突变检测的可靠方法,也是使用最多的方法。但其过程繁琐、耗时长,灵敏度不高,对环境和操作者有危害,故在临床应用中存在一定的限制。
基因突变检测方法:(1)pcr-sscp法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上,短的单链dna和rna分子依其大街基序列不同而形成不同构象,一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。
功能互补法:使突变株表达,与空白相对比。核酸杂交法:使用突变株基因单链与原基因杂交,能完全配就未能成功。
基因芯片测序技术可以将经过连锁分析锁定了目标范围或经过全基因组筛选的特定基因或区域进行更深一层的研究,是解决连锁分析无法发现致病基因的有效手段。基因芯片技术对于已知基因突变的筛查具有明显优势,可以快速、全面地检测出目标基因突变。
【答案】:A、B、C、D 从突变基因文库中筛选目的基因的高通量筛选技术有多种,常用的有平板筛选法、噬菌体展示法、荧光筛选法、酵母细胞表面展示法等。
基因检测可以诊断疾病,也可以用于疾病风险的预测。疾病诊断是用基因检测技术检测引起遗传性疾病的突变基因。应用最广泛的基因检测是新生儿遗传性疾病的检测、遗传疾病的诊断和某些常见病的辅助诊断。
如何筛选真正获得目的基因并能有效表达的重组子
1、抗性筛选。利用培养基中的药物进行筛选。重组子可获得抗性。2 影印筛选。利用核酸探针对具有目的DN**段的宿主进行筛选。3 营养**筛选。宿主是营养**型,重组子可使宿主获得营养补偿能力,从而起到筛选效果。
2、电泳法筛选重组子的原理是利用电泳技术将基因重组片段从其他DN**段中分离出来。
3、本实验利用抗生筛选转化子。 互补法:至今使用的许多载体(如PUC系列)有含有一个大肠杆菌DNA的短区段,其中含有β-半*糖苷酸基因(lacZ)的调控序列和头146个氨基酸偏码区。这个偏码区中插入一个多**位点。
4、获得含有目标基因的大片段**,然后以这些新的DNA为探针,获得更趋近目的基因的DN**段,不断缩小筛选区域,逐步向目的基因靠近,最终**到该基因。
5、一般有两种方法,一是用目的基因的特异性引物以重组质粒为模板,进行PCR扩增。看能否出现目的基因的扩增产物。
6、PCR鉴定法、酶切法、测序法 从转化后的菌体**中分离质粒,电泳,比较其分子大小。
如何进行目的基因和目的的cDNA的筛选?
筛选一般用主要采用杂交技术(如Northen杂交、Southen杂交),采用的是单链核酸间互补配对的原理,或者使用鸟*法导入,看性状能否表达。
以mRNA为模板,用反转录酶合成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增DNA。这里,关键是要预先获得目的基因的mRNA,mRNA极易降解,所以提取过程中要防止内源和外源RNase对其降解。
从基因文库中获取目的基因。cDNA文库。反转录法。人工合成法。目的基因,也称靶标基因,是指在实验中研究或操纵的特定基因。
从mRNA合成cDNA。采用一定的方法钓取特定基因的mRNA,再通过逆转录酶催化合成其互补DNA(cDNA),除去RNA链后,再用DNA聚合酶合成其互补DNA链,从而得到双链DNA。利用PCR合成。
获取目的基因的方法主要有基因组文库法、cDNA的**、反转录法、人工合成法等。从基因文库中获取这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了基因组文库法就是原教材中的用限制性内切酶直接获取。
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