今天冷知识百科网小编 梅凯宜 给各位分享薄层色谱有哪些作用的知识,其中也会对薄层色谱法应用的意义?(薄层色谱法应用的意义有哪些)相关问题进行解释,如果能碰巧解决你现在面临的问题,别忘了关注本站,现在我们开始吧!
薄层色谱法应用的意义?
薄层色谱法应用意义是利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同,使在流动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中,连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附,从而达到各成分的互相分离的目的。以涂布于支持板上的支持物作为固定相,以合适的溶剂为流动相,对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。这是一种快速分离诸如脂肪酸、类固醇、氨基酸、核苷酸、生物碱及其他多种物质的特别有效的层析方法,
薄层层析的原理是什么?
基本原理:吸附薄层色谱分离法,它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同,使在流动相流过固定相的过程中,连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附,从而达到各成分的互相分离的目的。在把微细分散的固体或是附着于固体表面的液体作为固定相,把液体(与上述液体不相混合的)或气体作为移动相的系统中,使试料混合物中的各成分边保持向两相分布的平衡状态边移动,利用各成分对固定相亲和力不同所引起的移动速度差,将它们彼此分离开的定性与定量分析方法,称为层析,亦称色谱法。根据移动相种类的不同,分为液体层析、气体层析二种。用作固定相的有硅胶、活性炭、**铝、离子交换树脂、离子交换纤维等,或是在硅藻土和纤维素那样的无活性的载体上附着适当的液体,也可使用其他物质。将作为固定相的微细粉末状物质装入细长形圆筒中进行的层析称为柱层析(column chromatogra-phy),在玻璃板上涂上一层薄而均的物质作为固定相的称为薄层层析(thin-layer chromatography),后者可与用滤纸作为固定相的纸上层析进行同样的分析,即在固定相的一端,点上微量试料,在密闭容器中,使移动相(液体)从此端渗入,移动接近另一端。通过这种展开操作,各成分呈斑点状移动到各自的位置上,再根据Rf值的测定进行鉴定。当斑点不易为肉眼观察时,可利用适当的显色剂,或通过紫外灯下产生荧光的方法进行观察。也可采用在第一种移动相展开后再用另一移动相进行展开(这时的展开方向应与原方向垂直),使各成分分离完全的双向层析(two-dimensional chromatography)。分离后,将斑点位置的固定相切取下来,把其中含有来自试料的物质提取进行定量分析。但为制备与定量,柱层析则更为适宜。在柱层析中,移动相从加入试料的一端展开到达另一端后,继续展开使各成分和移动相一起向柱外分别溶出,这就是广泛使用的所谓洗提层析(elution chromatography)。层析根据固定相与溶质(试料)间亲和力的差异分为吸附型、分配型、离子交换型(离子交换层析)等三种类型。但这并不是很严格的,有时常见到其中间类型。此外,近来也应用亲和层析,即将与基质类似的化合物(通常为共价键)结合到固定相上,再利用其特异的亲和性沉淀与其对应的特定的酶或蛋白质。
柱层析和薄层层析的异同及其应用范围?
1、方法不同
柱色谱又称层析法。是一种以分配平衡为机理的分配方法。
薄层色谱是在被洗涤干净的玻板(10×3cm左右)上均匀的涂一层吸附剂或支持剂,待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上,晾干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内,浸入深度为0.5cm。
待展开剂前沿离顶端约1cm附近时,将色谱板取出,干燥后喷以显色剂,或在紫外灯下显色。
2、原理不同
柱色谱包含两个相,一个是固定相,一个是流动相。当两相相对运动时,反复多次地利用混合物中所含各组分分配平衡性质的差异,最后达到彼此分离的目的。
薄色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同,或和其它亲和作用性能的差异,使混合物的溶液流经该种物质,进行反复的吸附或分配等作用,从而将各组份分开。
色谱作用有哪些?
色谱试剂用途广泛,凡用到高压液相色谱仪器的单位,如工厂、学校、医院、质检部门、商检部门、环保部门、石化行业、药业部门每天都用到大量的色谱淋洗剂。
薄层色谱的显示定位方法?
薄层色谱法的主要显色定位方法有:1、在日光下观察,划出有色物质的斑点位置。2、在紫外灯(254nm或365nm)下观察有无暗斑或荧光斑点并记录其颜色、位置及强弱。能发荧光的物质或少数有紫外吸收的物质可用此法检出。3、荧光薄层板检测,荧光薄层板是在硅胶中掺入了少量荧光物质制成的板。在254nm紫外灯下,整个薄层板呈黄绿色荧光,被测物质由于荧光猝灭作用而呈现暗斑。4、既无色又无紫外吸收的物质,可采用显色剂显色。
薄层色谱法的具体操作?
一:我们的薄层板制备,我们大家是要将1份的固定相和我们3份的水,在研钵中顺时针研磨和混合。
二:薄层板的活化,就是硅胶板在105-110℃烘上大概是30分钟的时间,而**铝板是150-160℃的。
三:就是点样,我们的点样的方式就是我们就分为手动点样和自动点样,我们大家在手动点样的主要器具就为微量毛细管。
四:就是展开,我们大家在展开剂的配制,就是配制展开剂的时候,我们要去严格的控制其比例的准确度。
薄层色谱点样时应注意哪些问题?
点样用打孔器把滤纸制成直径2毫米的小园片,随后把小园片戳附在小号缝衣针的针尖上,其大头部分固定在软木塞上,用微量注射器吸取酒样和配制的标准溶液,缓慢地点加在小园滤纸片上,边点加边用吹风机以100℃以上的热风把点样吹干。在活化并经过**的薄层板上,用缝衣针的大头把硅胶薄层抠掉一小孔,直径略小于2毫米,在小孔中用少许淀粉浆糊,把点加的酒样或标准溶液的滤纸片粘附于小孔上。希望对你有所帮助!
薄层色谱需要的试剂和仪器?
⑴载板用以涂布薄层用的载板有玻璃板、铝箔及塑料板,对薄层板的要求是:需要有一定的机械强度及化学惰性,且厚度均匀、表面平整,因此玻璃板是最常用的。载板可以有不同规格,但最大不得超过20×20,玻璃板在使用前必须洗净、干燥备用。玻板除另有规定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的规格,要求光滑、平整,洗净后不附水珠,晾干。⑵固定相(吸附剂)或载体薄层层析硅胶薄层层析硅胶最常用的有硅胶G、硅胶GF〈[254]〉、硅胶H、硅胶HF〈[254]〉,其次有硅藻土、硅藻土G、**铝、**铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F〈[254]〉等。其颗粒大小,一般要求直径为10~40μm。薄层涂布,一般可分无粘合剂和含粘合剂两种;前者系将固定相直接涂布于玻璃板上,后者系在固定相中加入一定量的粘合剂,一般常用10~15%煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小时),混匀后加水适量使用,或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.5~0.7%)适量调成糊状,均匀涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或缓冲液的薄层。⑶ 涂布器应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。⑷ 点样器定性:内径为0.5mm管口平整的普通毛细管。定量:微量注射剂。点样直径不超过4mm,点样距离一般为1~1.5cm即可。⑸ 展开室应使用适合载板大小的玻璃制薄层色谱展开缸,并有严密的盖子,除另有规定外,底部应平整光滑,应便于观察。(6)显色剂实验用的显色试剂或检测光源